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腹水样本的采集与保存

产品货号:ml036016

产品品牌:酶联

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试剂说明书

 腹水采集分成两类:

 
  1.活着抽取腹水
 
  2.处死抽取腹水
 
  活着抽取腹水主要用到的是酒精棉球与注射器(2-5ml) 以及灭后菌的eppendorf管(因为腹水还要分离所以用这个最好,便于离心)。方法就是用酒精棉球擦拭要进针的位置(大概是在腹部中线偏右侧处), 而后先让注射器中留点空气而后进针再将注射器慢慢往后推腹腔中有压力慢慢腹水会往外流,进针时要轻轻下上提一下,感觉无阻碍就好。
 
  处死抽取腹水就是用止血钳两把,剪刀小号2把,镊子2把即可。 先用剪刀镊子轻轻在小鼠腹腔外皮剪一个小口,而后用两把止血钳轻轻两边拉开,使露出腹部,而后用另一把剪刀镊子剪开内皮,用枪或玻璃直管即可去腹水。也建议放置eppendorf中。
 
  胸水的采集:
  主要采用胸腔穿刺法收集实验动物的胸水,也可处死实验动物剖开胸腔采集胸水。
 
  穿刺点定位:
  于实验动物脊侧腋后线第11~12肋间隙穿刺,穿刺针紧贴肋骨上缘,否则容易损伤肋间神经。此部位是肺最下界之外侧,既可避免损伤肺组织造成气胸,又易采集在隔肋窦的胸水。此外,也可在腹侧胸壁近胸骨左侧缘第4~5肋间隙穿刺。
 
  穿刺方法:
  实验动物取立位或半卧位固定,局部皮肤去毛、消毒、麻醉,穿刺针头与注射器之间接三通连接装置,实验人员以左手拇指、食指绷紧局部皮肤,右手握穿刺针紧*肋骨下缘处垂直进针,穿刺肋间肌时产生一定阻力,当阻力消失有落空感时,说明已刺入胸膜腔,用左手固定穿刺针,打开三通连接装置,缓慢抽取胸水。
 
  操作中严防空气进入胸腔,始终保持胸腔负压。穿刺应用手控制针头的深度,以防穿刺过深刺伤肺脏。
 
  建议保存在-80度冰箱。

腹水样本的采集与保存内容及其配制

腹水样本的采集与保存自备材料
1)蒸馏水。
2)加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3)振荡器及磁力搅拌器等。

腹水样本的采集与保存安全性
1)避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

腹水样本的采集与保存操作注意事项
1)试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3)不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4)使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5)使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6)洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7)底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8)加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9)按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

腹水样本的采集与保存样品收集、处理及保存方法
1)血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

腹水样本的采集与保存试剂的准备
1)标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2)洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

腹水样本的采集与保存操作步骤
1)使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
3)加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5)每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6)甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8)取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9)在450nm波长处测定各孔的OD值。

腹水样本的采集与保存局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。

腹水样本的采集与保存性能
1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

腹水样本的采集与保存结果判断与分析
1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的待测物质标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。