曙红亚甲基蓝I
中文名称：曙红亚甲基蓝I
其他中文名称：瑞氏色素；瑞氏染色素；赖氏色素；曙红变性次甲蓝；瑞氏染液；赖特染色剂；瑞特染色剂
英文名称： Wright′s stain
其他英文名称： Eosin Methylene blue according to Wright；Rosin methylene blue I
产品规格： BS
包装：25克/500克
产品规格： BS
包装：90毫升
产品规格： 高纯
包装：25克/100克
CAS号：68988-92-1
级别：BS
生物染色试验Dyeing test：合格
曙红亚甲基蓝I级别：High Purity Grade
Visible Abs. Max. (Wavelength) 2(nm)：645～649
Visible Abs. Max. (Wavelength) 1(nm)：523～526
Solubility (MeOH)：Pass
操作步骤：
1. 平置血涂片于染色架上，滴加试剂一3～5滴，使其迅速盖满血膜，染色1分钟左右，以固定血片
2. 不要倒丢试剂一，直接滴加试剂二6～10滴，轻摇玻片或用洗耳球对准血涂片吹气使染液充分混合，染色5～8分钟
3. 水洗30秒，待干后镜检
染色结果：
1. 红细胞呈浅红色，中央稍淡而略有蝶形态
2. 白细胞系统清晰易分，细胞膜清晰呈紫黑色，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆浅红色。胞浆中各种颗粒区分明显。其中中性粒细胞胞浆中颗粒呈淡紫红色、嗜酸粒细胞胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色；单核细胞的胞浆呈灰蓝色，胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色；淋巴细胞胞浆呈淡蓝色
注意事项：
1、 推片：取全血3微升左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片30度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动，至血液铺完血膜为止。
2、 涂片时不要太厚也不要太薄。太厚红细胞重叠并易皱，太薄时不易找到白细胞。
3、 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血膜易脱落。
4、 试剂一及二染液不能过少，以防很快蒸发引起染液沉淀。试剂一不可少于400微升，试剂二是试剂一的1倍量。滴加试剂一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气，使染液充分混合。
5、 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。溃洗 时间也不能太长。一般在30~50秒左右。
染色过淡，可复染。染色过深，可用水冲洗或浸泡，还可用70%乙醇脱色3~5秒。
性状：液体
用途：生化研究。应用于血液和骨髓涂片染色。仅供科研
性状：浅绿色粉末。是复合中性染色剂。对原生质的染色有嗜中性、嗜碱性和嗜酸性部分的作用。溶于乙醇，不溶于水。最大吸收波长 640(522)nm
曙红亚甲基蓝I用途：生化研究。显微镜涂片用染色剂，如血、骨髓的染色、血液中寄生虫染色(原 虫、利什曼原虫、血丝虫等)。
保存：RT
曙红亚甲基蓝I内容及其配制
曙红亚甲基蓝I自备材料
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
曙红亚甲基蓝I安全性
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
曙红亚甲基蓝I操作注意事项
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
曙红亚甲基蓝I样品收集、处理及保存方法
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
曙红亚甲基蓝I试剂的准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
曙红亚甲基蓝I操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
曙红亚甲基蓝I局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
曙红亚甲基蓝I性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
曙红亚甲基蓝I结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
