Hotstart Taq DNA聚合酶
中文名称：Hotstart Taq DNA聚合酶
其他中文名称：Hotstart Taq酶
英文名称： Hotstart Taq DNA Polymerase
产品规格： BR，5u/ul，99%
包装： 500U/1KU
分子量：94kDa，单体
级别：BR
纯度：≥99%
浓度：5u/ul
Hotstart Taq DNA聚合酶活性定义：在74℃、30分钟内，使10nmol脱氧核糖核酸合成渗入多聚核苷酸（吸附在DE-81上）所需的酶量
酶活性分析混合物：25mM TAPS(PH9.3,25℃), 50mM KC1, 2mM MgCL2, 0.2mM各种dATP,dGTP,dTTP, 0.1mM dCTP, 0.75mM活化的鲑鱼精DNA和0.4MBq/ML(3H).-dTTP
保存缓冲液组分：20mM Tris-HCL(PH9.0), 1mM DTT, 0.1mM EDTA,100mM KC1, 0.5%(V/V) Tween 20，0.5%(v/v) Nonidet P40和50%(v/v)甘油
10×Hot start PCR Buffer：200mM Tris-HCL(PH8.3,25℃), 200mM KC1, 50mM (NH4)2SO4
抑制剂：阴离子去污剂（脱氧胆酸、肌氨酰和SDS的浓度分别高于0.06、0.02和0.01%时）
失活：酚/氯仿抽提
质量控制：相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染
功能启动：热启动PCR
性状：液体。设计用于增强DNA扩增的特异性、敏感性和产量。使用该酶可在室温配制反应体系，使用方便。它是一种化学修饰的重组Taq DNA Polymerase，蛋白分子氨基酸残基上增加了热不稳定的封闭基团。该酶在室温下没有活性，避免形成引物二聚体和非特异性延伸，从而增加DNA扩增的特异性。95℃加热4分钟可恢复活性。活化的酶具有与Taq DNA Polymerase相同的功能：催化5——3方向合成DNA，无可检测的3——5校正外切酶活性，具有较低的5——3外切酶活性。该酶还具有脱氧核糖核酸酶转移活性，在PCR产物的3-端多加11个腺嘌呤，活化前检测不到这些活性。
Hotstart Taq DNA聚合酶用途：生化研究。高产量扩增复杂模板；PCR特异性高-降低错配效应和减少引物二聚体的生成；增强的PCR敏感性；使用方便，室温配制PCR反应体系；扩增产物具有3-dA突出末端；热启动PCR；高产量扩增长达3kb片段；RT-PCR；特异性扩增复杂cDNA和基因组模板；扩增低拷贝DNA模板；实时PCR；多重PCR；制备TA克隆用PCR产物
保存：-20℃，保质期1年
Hotstart Taq DNA聚合酶内容及其配制
Hotstart Taq DNA聚合酶自备材料
1）蒸馏水。
2）加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振荡器及磁力搅拌器等。
Hotstart Taq DNA聚合酶安全性
1）避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2）实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3）不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
Hotstart Taq DNA聚合酶操作注意事项
1）试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2）实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3）不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4）使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5）使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6）洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7）底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8）加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9）按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
Hotstart Taq DNA聚合酶样品收集、处理及保存方法
1）血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2）血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3）细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4）组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5）保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
Hotstart Taq DNA聚合酶试剂的准备
1）标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。
2）洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
Hotstart Taq DNA聚合酶操作步骤
1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
Hotstart Taq DNA聚合酶局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
Hotstart Taq DNA聚合酶性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
Hotstart Taq DNA聚合酶结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
